徕卡荧光显微镜需要在暗室内进行观察，否则因有其他光线而影响观察的正确性。
荧光的产生是由于某些物质被辐射线波长较短的光线照射后即发出波长较长的可见光，有的物质或细胞本身并不产生荧光，但在光色素浸润下即能产生荧光。
观察方法可分为两种：
（1)暗视场照明法将紫外光照明器前面的全部滤光片用上，这时汞气灯所发射的全部可见光被滤去，而透过的紫外光，其波长约为3000A~3600A此乃正常的荧光观察法。
(2)深蓝视场照明法将靠近紫外光照明器光源的两组滤光片用上，这时把汞气灯发生的光波限制在一定的波长内(3000A一4500A)，视场内有深蓝色的背景出现，是为求得足够强度的紫外光照明标本。
为了使照明标本的紫外光线不进入观察看的眼睛，以免损坏眼睛和影响荧光观察的正确性起见，在物镜与目镜之间安装有两组滤光片，并可配合组成各种颜色，使用时极为方便．
在使用徕卡荧光显微镜时，应把定距尺安装在紫外光照明器与显微镜之间，以保持照明器的正确位置。
该徕卡荧光显微镜也可安装白识灯照明器，灯泡为6V15W之白炽灯，其插头应与变压器上白炽灯头插座相连接。
作荧光观察时，标本所用的载物片，采用石英载物片，当无石英载物片时，亦可采用普通玻璃裁物片，因普通玻璃对较长波段之紫外光吸收并不多。
高压汞气灯一经熄灭，要等到汞气灯冷却后才可重新发光因而在进行连续观察分析时，不应中途灭灯，以免浪费时间。
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