徕卡显微镜的标本制备方法
徕卡生物显微镜70年代在探针技术上有两大进展，是将透射电镜与x微区分析结合*第二是固态能量色散x一线探测器的应用。这便使得操作人员可将一细电子束准确地置于某细胞器内，使探针电流控制在几个nA范围内，减少了对标本的损伤，提高了像的质量。为此，对标本的制备提出了更高的要求。几个实验室不约而同地在探索如何在保存超微结构的同时也保存元素成分在原位而不移动或丢失。HaH实验室的工作人员研究肌细胞线粒体对钡的摄取，他们发现用醋酸铀染色后线粒体中只有铀而无钡，只有在不经染色的标本中线粒体内才有钡。他们在研究鸡胚红细胞核中的钠和其它电解质时，发现胞核内钠浓度几乎与胞外介质无差别。但他们对标本进行徕卡冰冻切片机和冰冻干燥处理后，发现上述结果是错误的。因此Hall等认为标本制备的方法是将组织立即冰冻(即粹冷固定)．然后做冰陈超薄切片。或对冰冻超薄切片直接观察分析，或将其冰冻干燥后再观察。他特别提出在分析组织的细胞外空间成分时，用未经干燥的冰冻超薄切片直接分析。
徕卡生物显微镜由于组织未经四氧化钥固定和染色，在经过冰凉固定后结构虽得以保存．但反差相当差。人们又想到是否可用低温置换固定或组织经冰冻干燥后再包埋、切片及染色以提高反差，增进像的质量。R加s实验室在此方面做了较深入的工作。他们以大鼠胰腺外分泌细胞不同部位的电解质分布为观测对象，比较几种标本处理方法的优劣。首先对大鼠做主动脉灌注，然后对胰腺作原位冰冻固定．或移出后做冰冻固定。
他们对徕卡生物显微镜冰冻固定后的胰腺用自制的装置做以下几种处理；1．作多聚甲醛和四氧化俄低温置换固定及树脂包埋(Fs)；2．低温干燥后进行树脂包埋(四)和L冰冻超薄切片后进行冰凉干燥(cs)。然后分别对细胞的顶部胞浆、基部脑浆、酶元颗粒及钱粮体中的Ha、M8、P、s、酗、K及Ca做定量测定(删1／k8drywt)。其结果如表lo一1所示。由表可见，几种方法的结果十分不同。低温置换固定后包埋使电解质丢失多。即使低温干燥后做树脂包埋也有明显丢失，特别在顶部及基部胞浆中磷和钾丢失多。RoM等认为是由于使用了高度疏水的sPun和Epn树脂包埋时，使磷脂提取，质膜损伤后胞内可移动的钾及其它成分漏出所致。因此，RM的结论是对于研究元素在细胞内不同部位及细胞器中的分布而言，组织冰冻固定、冰冻超薄切片及随后的冰冻干燥是的方法。
备注：徕卡生物显微镜的标本制备方法部分新闻由北京悦昌行科技有限公司编辑上传。